狂犬病毒检测——病原检测
狂犬病毒检测的抗原检测方法:
免疫荧光法检测抗原:病人的脑脊髓液或唾液直接涂片、病人的角膜印片或咬伤部位皮肤组织或脑组织印片或冷冻切片,丙酮固定,抗狂犬病毒特异性荧光抗体染色检测狂犬病毒抗原。
快速狂犬病酶联免疫吸附法检测抗原:
(1)用 pH 9.6 的碳酸盐缓冲液稀释的抗狂犬病毒核衣壳 IgG 包被 96 孔酶标板,4℃过夜;
(2)用含 0.3%牛血清白蛋白和 5% 蔗糖的 pH9.6 碳酸盐缓冲液封闭 30 分钟;
(3)将采集到的标本研磨,用 pH 7.4 PBS制成 30%的悬液,离心取上清加入酶标板孔内,同时设阴性、阳性对照,200 µ l/孔,37℃孵育 1 小时;
(4)洗板四次后加入纯化的酶标记抗狂犬病毒抗体 200μl/孔,37℃ l 小时后洗板,加入酶反应底物,室温作用 30 分钟,2M H2SO4 终止反应,肉眼观察或酶标仪测定结果。
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