微生物转录组测序
细菌转录组测序是在实验中通过去除总RNA的核糖体后进行转录组测序,该实验除了发现基因的差异表达之外,还可以对物种的基因组进行重新的注释,包括鉴定新基因,sRNA(还包括Ribo-switch),anti-sense RNA,5’UTR,4’UTR,operon等。
1. 测序质量评估分析;
2. 测序结果的随机性分析
3. RNA-Seq生物信息学分析
4. 基因表达及差异分析
5. 差异基因COG/KO/GO富集分析
6. sRNA预测及差异分析
7. UTR预测
8. Operons预测
我们采用链特异性测序文库,在进行细菌转录组测序研究中,相对于传统的非链特异性文库,不仅可以更准确的计算基因的表达量,同时可以特异性地发现更多的antisense ncRNA。
Mapper RNAs Type | 普通测序文库 | TK链特异性文库 |
Clean reads | 21829406 | 24122016 |
Matched genome | 20737935 | 22920740 |
Matched genome(%)a | 95.00% | 95.02% |
protein-coding genes(sense)b | 46.06% | 89.09% |
protein-coding genes(antisense)b | 46.03% | 2.05% |
ribosomal RNAs(sense)b | 2.86% | 2.29% |
ribosomal RNAs(antisense)b | 0.00% | 0.00% |
transfer RNAs(sense)b | 0.00% | 0.00% |
transfer RNAs(antisense)b | 0.00% | 0.00% |
miscellaneous RNAs(sense)b | 1.50% | 1.50% |
miscellaneous RNAs(antisense)b | 0.00% | 0.00% |
unannotatedb | 2.54% | 3.57% |
(一)样品类型
1. 总RNA;样品浓度:≥250 ng/ul;样品总量:>10ug;样品纯度: OD260/280为1.8~2.2,OD260/230≥1.0,260nm处有正常峰值。RNA完整性: 电泳检测28S/18S≥1.5。
2. 组织:样品取样后立即液氮速冻,保存于液氮或超低温冰箱中。请尽量使用新制备的样品且样品量至少满足3次以上提取;
(二)样本运输
1. 总RNA样品请溶于RNase-free H2O或乙醇中,置于1.5 ml RNase-free离心管中,管上注明样品名称、浓度以及制备时间,管口使用Parafilm封口,干冰运输;
2.菌体取样后置于冻存管中并标注,使用足量的干冰运输,并且尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。
飞凡检测质检报告流程:
1、 提供产品资料
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